洁净区表面微生物及人员监测

课题

洁净区表面微生物及人员监测

计划

课时

4

教学目的要求

1、掌握洁净区表面微生物及人员测试的一般方法；

2、熟练对洁净区表面微生物及人员测试。

重点

难点

重点：洁净区表面微生物及人员测试的实操

难点：洁净区表面微生物及人员测试的方法

授课

方法

讲授、示范、操作

图例

见教学内容

教具

培养皿、酒精棉球等

教学场所

生物检定室

时

间

分

配

洁净区表面微生物及人员测试方法的讲解―――――――————————20分钟

洁净区表面微生物及人员测试实操―――――――—————————――100分钟

结果的判断及分析―――――――—————————――20分钟

总结、点评学生操作清洁场地——————————————20分钟

教学设计

本节课是洁净区环境监测项目的一部分，先制备培养基，灭菌，再进行采样，注意采样点的位置。最后在培养以后观察实验结果，从而判定洁净区表面微生物及人员测试是否符合要求。

实训内容

正确对洁净区表面微生物及人员进行测试

教学过程

一、新课导入

1、洁净区表面微生物及人员测试的必要性

除了用空气微生物取样来监测生产环境的微生物负荷外，表面监测也用来监测生产区域表面以及设备和与产品接触表面的微生物量。监测的方法必须考虑取样的准确性和代表性。基本的监测方法包括接触碟，擦拭法以及表面冲洗法。每种提供的数据都可以用于产品质量的评价。测试方法可以是定性和定量。由于取样的准确性受收集和处理样品的过程影响，因此必须对取样进行培训和测试。表面微生物测定的目的是确定洁净区中物体（包括工作服）表面微生物污染的程度以及洁净区消毒的效果。通常采用直接接触法取样。

2、表面微生物监测的几种方法

洁净区表面微生物测试必须在动态下监测，监测方法如下：

1．接触平皿法

（1）按沉降菌检测方法清洗直径为50~55mm的培养皿后，加入配制好的营养琼脂培养基充满碟子并形成圆顶（取样面积一般约为25cm²），装入具盖不锈钢筒中或牛皮纸袋，于121±0.5℃蒸汽灭菌30min，检测无菌后待用。

（2）将无菌平板用无菌法带入测定区域内，打开碟盖，无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样点表面均匀充分接触5秒钟左右，再盖上碟盖。取样后立即用适当的消毒剂擦拭被取样表面，以出去残留琼脂。

（3）全部无菌平板都采集完微生物后，置于培养箱内，37℃下培养２４小时。计算每个培养皿中的菌落数后按沉降菌检查法中的方法清洁培养皿。

2．棉签擦拭法

本方法适用于平皿接触法不适用的设备和不规则表面的取样。棉签的种类可以选择棉质、涤纶等。棉质和涤纶棉签可以浸入到肉汤培养基内以提供定性结果。

棉签头在取样前应现行浸湿（通常为无菌生理盐水或0.1%的蛋白胨溶液约50ml），取样时，握住棉签柄，以约30°角与取样表面接触，缓慢并充分擦拭，取样面积24～30cm²（可用特定的无菌模板确定擦拭面积），然后将取样头折断放入上述溶液内，充分振荡，再用平皿涂布法或铺平板法计数。如果棉签头的材料为藻酸钙，则要用稀的盐溶液作为稀释剂（如1%柠檬酸钠溶液），这样才能让棉签头完全溶解。擦拭法于接触碟法相比，因为擦拭取样的面积一般约为25 cm²，故擦拭法也属于定量检测方法。

3．表面冲洗法

当需要确定设备内表面的生物载荷时，或面积较大时采用该法。用无菌水来冲洗内表面，然后收集、膜过滤后，得到定量结果。

3、人员的监测及方法

1．人员监测取样位点的选择

手套和操作服表面的微生物监测是人员监测的关键。手套取样时应包括双手的手指和手掌，操作服表面取样主要是前臂的袖管部位、前胸等，鞋套的取样部位宜在套筒的上侧面（此部位在穿戴时易被污染）；为避免干扰，宜在生产活动结束时取样（人员离开无菌生产区时取样）。

2．测试方法

人员监测的方法于表面微生物监测方法中的接触碟法相同。

（1）取样

取样前检查接触琼脂平皿，并在接触碟上表明操作员姓名、日期、取样部位和取样人姓名。

（2）培养、结果观察和报告

将包括阴性对照在内的所有平皿先于20～25℃培养72小时，再转至30～35℃培养48小时。培养结束时，对每个培养皿的菌落数进行计数并报告最终结果。对于从无菌区操作员的无菌服和手套上分离得到的微生物，必要时进行菌种鉴定。污染的平皿经121℃高压灭菌处理后方可销毁。.

4、洁净区表面微生物及人员测试实操

5、对监测结果进行判断及分析

6、逐个对学生提问，要求其他学生互动，纠正在回答问题上的理解错误，巩固所学知识，进入综合评分考核。

7、清场，指导学生正确填写各项记录、表格。

习题

思考：人员监测特别需要注意哪些地方的采样？

答：手套和操作服表面的微生物监测是人员监测的关键。手套取样时应包括双手的手指和手掌，操作服表面取样主要是前臂的袖管部位、前胸等，鞋套的取样部位宜在套筒的上侧面（此部位在穿戴时易被污染）；为避免干扰，宜在生产活动结束时取样（人员离开无菌生产区时取样）。

教学评价与反思

学生对于监测自己实训服及手上的微生物数量很有兴趣，所以课程开展十分顺利。