项目教学设计方案
作者： 林勇
单位： 江西省医药学校
课程
试验十四
周
次
单、双周
授课
班级
教师
林勇
课题
洋地黄生物检定法
计划
课时
6
教学目的要求
知识目标：1、熟悉洋地黄的生物学性状与药理作用。
2、熟悉洋地黄生物检定原理。
技能目标：1、学会标准品溶液和稀释液的制备。
2、学会洋地黄生物检定法的操作。
3、学会洋地黄生物效价测定的结果计算和评价。
重点
难点
重点：洋地黄生物检定法的操作
难点：黄生物效价测定的结果计算
方法
讲授、示范、操作
图例
见教学内容
教具
容量瓶、试管、恒温箱
教学场所
实训楼 分析实验室
时
间
分
配
1、实验室仪容、仪表要求―――――――—————————―5分钟
1、清洗实验器材并进行干燥灭菌――――――――――――――30分钟
2、供试品溶液和标准品溶液的配制―――――――――――――30分钟
3、实验用鸽的挑选和编码―――――――――――――――――40分钟
4、分组注入标准品、供试品和鸽子操作―――――――――――40分钟
5、观察鸽子生命体征情况并记录结果――――――――――――80分钟
6、根据记录结果进行计算和清场――――――――――――――5分钟
教学设计
本节课是物品中生物活性的检定方法的第一次课，教学中结合学生的原有知识水平、心理情况的特点进行教学设计。开课由老师点评实验报告，阐述课程学习内容与目标，调动起学生的情绪使他们身心能尽快进入学习状态。在对生物检定法的作用机理和适用范围的讲解后，以“洋地黄生物检定法”为例展开对生物检定法的学习。以洋地黄的基本成分为切入点，进而介绍其作用机理以及功效。然后引出生物统计发，向学生介绍效价计算和误差项及可信限的计算，再通过实验，让学生动手，从而加深对知识的认知理解，掌握更形象更深刻。课程中期，先以老师做示范，在老师的指导让学生体验观察模仿、相互学习、相互指出错误、操作竞赛等学练方法，完成独立学练过程。课后思考题让学习内容学习得以延续。
实训内容
鸽法测定洋地黄叶粉的效价
教学过程
一、新课导入
1、洋地黄的基础知识
洋地黄为玄科植物紫花洋地黄的干叶及其制剂。含有多种强心苷，主要成份为洋地黄毒苷，异羟基洋地黄毒苷，吉妥辛等，多产于我国四川、浙江等地。是一类能选择性作用于心脏，增强心肌收缩，改善动脉系统供血，解除静脉系统淤血的攻效，对不同原因引起所心功能不全都有一定疗效。洋地黄的主要成份为洋地黄毒甙（Digitoxin）,异羟基洋地黄毒甙（Digoxin），吉妥辛（Gitoxin）等，是一类能选择性作用于心脏，增强心肌收缩的药物，又称强心甙类，强心甙由于增强心肌收缩性，使心输出量增加，从而改善动脉系统供血状况，由于心排空完全，舒张期延长，使回心血量增高，静脉压下降，从而解除静脉系统淤血症状。强心甙对不同原因引起的心功能不全都有一定疗效，但疗效因情况不同而异。洋地黄类药物在临床治疗中发挥了重要作用。现在国内市场上尚有片剂及酊剂生产，每片0.1g（1个单位），作为原料的洋地黄干叶，每g效价不得低于10 u。
二、教学步骤
一、测定前的标准品、供试品与血浆的制备
（一） 标准品溶液的制备与稀释
迅速精密称取洋地黄标准品适量，避免吸潮，置玻璃容器内，按标示效价计算，每1单位精密加入76%乙醇（95%乙醇与水之比为4：1）1ml，密塞，连续振摇1小时，静置片刻，用干燥滤器迅速滤过，防止乙醇挥发，滤液即为每1ml中含1单位的溶液，密封，置于4~8℃贮存备用，经验证保持活性符合要求的条件下，可在1个月内使用。
试验当日，精密量取标准品溶液适量，用0.9%氯化钠溶液稀释，稀释液浓度（u/ml）应调节适当（一般可用1→30），使鸽的平均最小致死量为25~34ml。
（二） 供试品溶液的制备与稀释
供试品如为粉末，精密称取适量，按标示量或估计效价（AT），照标准品溶液及其稀释液的方法制备；供试品如为片剂，取20片以上，精密称重，求出平均片重，迅速研成细粉，再精密称取不少于20片的粉末，求出平均片重，迅速研细，再精密称取不少于20片的粉末，按称重及标示量（AT）计算，照标准品溶液及其稀释液方法制备。供试品稀释液和标准品稀释液的鸽平均最小致死量（ml）应相近。
二、测定法
取健康合格的鸽，于试验前16~24小时禁食，但仍给予饮水，临试验前准确称重，选取体重在250~400g的鸽（每次试验所用鸽的体重相差不得超过100g），按体重随机等分成
两组，每组至少6只，一组为标准品组，一组为供试品组，两组间鸽的情况应尽可能相近。
将鸽仰缚于适宜的固定板上，在一侧翼静脉处拔除羽毛少许，露出翼静脉，插入一适宜的与最小刻度不大于0.02ml滴定管相连的弯注射针头，缓缓注入标准品稀释液或供试品稀释液，开始时，一次0.5ml ,然后以每分钟0.2ml等速连续注入，在整个过程中可按表5-3随时核对已注入的药液决量是否符合要求，在规定的速度下应注入的药液总量，其相差不得超过0.4ml，至鸽中毒死亡立即停止注入。一般死亡前有强烈颤抖、恶心呕吐、排便等现象发生，直至瞳孔迅速放大、呼吸停止为终点。操作流程如图5-3，记录注入稀释液的总量（ml），换算成每1kg体重致死量（ml）中所含效价（u/kg）,取其10倍量的对数值作为反应值，按上述生物检定统计法中的直接测定法计算效价及实验误差。
本法的可信限率（FL%）不得大于5%。
三、实验结果记录
1．认真观察以实验用鸽瞳孔迅速放大、呼吸停止为终点。记录注入稀释液的总量（ml）于表5-4中：
2．根据《中国药典》（2010版）采用鸽最小致死量（MLD）法。直接测定MLD计算求效价、可信限和可信限率。
本法的可信限率FL%不得大于15%，根据生物检定法公式①～⑨计算PT的FL%为6.71%,实际误差符合要求，实验结果成立。
如果可信限率大于15%，则应重复进行试验。
鸽法测定洋地黄叶粉效价：
…
1号鸽
2号鸽
n号鸽
0.2ml/min等速连续注入
标准品组
供试品组
标准品的称量
供试品的称量
标准品的溶解
供试品的溶解
标准品的稀释
供试品的稀释
记录注入稀释液的总量（ml）
中毒死亡
3．注意事项：
①配制标准品或供试品过程中，过滤时间应昼缩短，以防止乙醇挥发，影响浓度，室温高时尤为重要。一般可于振摇后放置片刻或经过离心再倾出上清液过虑，可加快过虑速度。
②洋地黄类药物效价测定，过去兼用麻醉或不麻醉方法，多年实验证明，鸽比较驯服，只要固定好，不麻醉也能保持安静，不影响实验，并可避免麻醉深浅不匀带来的误差，还可以节省试药。
③插翼静脉的针头及装置，采用适当型号的小儿头皮针，用乳胶管连于滴定管，或采用7-8号针头，以针也面向上，轻轻弯曲至成约130°角，再将针头稍磨钝，连接于1ml注射器套管，上端以透明胶管连接滴定管即成。
④插翼静脉的方法：将鸽固定好后，拔去翼下羽毛静脉清晰可见，将连接管的针头插入静脉。不需将静脉肃离出来，因剥离反使静脉受刺激变细，并因周围无组织固定，针头易滑动，容易脱出。选择在翼静脉较直的一段插针头，插入静脉约8mm。注意针头在静脉内的方向应与血管平等，以免挑破静脉，并注意勿将针头口放置在静脉的分支处，以防被回血凝塞针头。
⑤针头插入静脉前应看好滴定管刻度，插入静脉后，应立即打开活塞灌注0.5ml溶液，将回血冲入静脉以防止凝血，此后再按实验要求迅速调整好灌注速度。灌入溶液时如发现注入困难或注射部位有水肿起，则针头未插入静脉，应将针孔入用止血钳夹住现拔出针头，以防止大出血在。此时如静脉仍清晰，可再插，否则应换另侧翼静脉。如在注射药液过程中，发现针头凝塞，可先将滴定管活塞关住，捏挤滴定管，继续注入药液（此时如鸽立即死亡，则实验结果不能用）。如凝块仍不能去除，可将注入的容量记录后拔出针头，少将凝块再插入静脉继续灌注。但操作要求迅速，此段时间应尽量缩短，否则影响全部灌注速度，使结果不准确。
⑥实验动物一般用6只即可，如果可信限大于15%，除了检查动物来源、实验操作是否符合要求外，应增加每组擞 以减少误差。
四．书写检定报告
五.逐个对学生提问，要求综合评分考核。提问与学生互动回答半课时。其他学生互动，纠正在回答问题上的理解错误，巩固所学知识，进入
六、清场，指导学生正确填写各项记录、表格。半课时。
习题
思考：实验动物一般用几只即可？
答：实验动物一般用6只即可
教学评价与反思
整个教学过程学生基本按预先的教学设计意图有效的完成了教学内容，对知识点及技术动作的掌握都达到了预期目标。
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